Il protocollo di estrazione CTAB

Autore: Bobbie Johnson
Data Della Creazione: 1 Aprile 2021
Data Di Aggiornamento: 20 Novembre 2024
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DNA Extraction Protocol from bacteria
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I composti chimici cetiltrimetilammonio bromuro, esadeciltrimetilammonio bromuro, palmitiltrimetilammonio bromuro e cetrimonio bromuro sono tutti noti anche da CTAB. La sostanza chimica viene utilizzata come mantenitore di pH nel genoma sequenziale del DNA, in particolare le piante.


La fresatura rompe le pareti cellulari delle piante per l'estrazione del DNA (Jason Reed / Ryan McVay / Digital Vision / Getty Images)

Formula CTAB

Le quantità delle formule dei vari prodotti chimici CTAB variano a seconda del laboratorio. Tuttavia, tutti gli ingredienti comprendono 1 M Tris HCl pH 8,0, 0,5 M EDTA, 5 M NaCl e H2O (a volte due volte distillati). Per il componente CTAB, alcuni laboratori usano il bromuro di cetiltrimetilammonio e altri bromuro di esadeciltrimetilammonio.

Preparazione di tessuti vegetali

La preparazione del tessuto vegetale può variare a seconda del materiale. Le pareti e le membrane cellulari devono essere rotte per accedere alle materie nucleari senza alcun degrado. Normalmente, nella macinazione, il materiale vegetale con azoto liquido consente l'accesso al DNA, mantenendo enzimi cellulari nocivi e sostanze chimiche inattive.


Sospensione e centrifugazione

Il tessuto schiacciato viene posizionato sulla lama CTAB e inserito in una ciotola di acqua corrente. Viene quindi miscelato con cloroformio e centrifugato per separare le proteine ​​solubili e altri materiali. Il DNA viene quindi precipitato dalla fase acquosa e lavato accuratamente per rimuovere i sali contaminanti. Il DNA purificato viene quindi prelevato e stoccato su un vetrino TE o acqua distillata sterile.