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L'elettroforesi su gel di agarosio è una procedura scientifica utilizzata in progetti di ricerca e diagnostica che riguardano lo studio degli acidi nucleici. Permette allo scienziato o al tecnico di separare le molecole di acido nucleico caricate, come il DNA, in base alle loro dimensioni, e viene utilizzato per analizzare i prodotti generati dall'esperimento, come la reazione a catena della polimerasi. Viene utilizzato di routine perché è economico da eseguire, processo veloce e consente il recupero dell'acido nucleico analizzato.
Fare il gel
Colleziona tutti gli articoli necessari e puliscili con etanolo al 70%. Gli articoli includono vassoio di colata in gel, nastro adesivo, agarosio di laboratorio, fiasche o cilindri, tampone da 10x concentrazione (tris-borato-EDTA, TBE), bromuro di etidio, colorante e campione da analizzare. Assicurarsi inoltre di disporre di un serbatoio di elettroforesi su gel e di una fonte di alimentazione. L'agarosio viene preparato pesando la quantità appropriata di nastro DNA da analizzare, mescolandolo con il tampone TBE e fondendolo nel microonde. In generale, una soluzione dall'1% al 2% è sufficiente per coprire molti filamenti di DNA studiati nella biologia molecolare quotidiana. I piccoli DNA richiedono gel più concentrati, mentre quelli più grandi richiedono gel più diluiti. La soluzione di agarosio viene miscelata con bromuro di etidio, che si legherà all'acido nucleico durante la procedura di elettroforesi. Questa soluzione viene versata nel vassoio di fusione del gel, proprio come viene inserito un pettine di formatura e la miscela viene lasciata solidificare.
Inserisci e attiva il gel
Il gel viene rimosso dal vassoio e immerso in un serbatoio di elettroforesi su gel contenente tampone di corsa. I campioni da analizzare vengono mescolati con i coloranti e posti nei pozzetti nel gel creato dal pettine. È inoltre incluso un marcatore o una scala per consentire allo sperimentatore di vedere il progresso dell'elettroforesi e determinare la dimensione dei frammenti generati. Quindi viene applicata una corrente elettrica al gel, che forza il campione a migrare da un'estremità del gel all'altra. Durante questo processo, gli acidi nucleici del campione si separano in frammenti di dimensioni diverse, con molecole più grandi avvicinandosi al pozzo e molecole più piccole che si spostano dall'altra parte del gel.
Analizza il gel
Dopo aver terminato la procedura di elettroforesi, il gel viene rimosso dal serbatoio e posto in un transilluminatore UV, che illumina i frammenti di acido nucleico che si legano al bromuro di etidio fluorescente. Una fotografia di questo è fatto e le bande degli acidi nucleici possono essere misurate in base alla distanza che è migrata attraverso il gel. La scala le separerà in bande di dimensioni note e può essere utilizzata per guidare il ricercatore durante l'analisi.